蛋白样品中TFA残留分析参考USP 503.1

蛋白样品中的TFA（三氟乙酸）残留是一个常见问题，主要源于多肽合成或纯化过程。残留的TFA会严重影响后续实验的准确性和可靠性，因此需要重视其残留量的检测。

参考USP 503.1标准：多肽中三氟乙酸的含量测定项下方法，使用大曹三耀2支C18色谱柱（疏水性SUPERIOREXII ODS、中等级性DAISOPAK SP-120-5-ODS-P），以及特殊官能团-金刚烷基键合的超高表面极性CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱，对蛋白（胰岛素）及三氟乙酸混合溶液进行分析。

结果如图1、表1所示，3款不同的色谱柱均可获得胰岛素及三氟乙酸混合溶液的良好分析结果。空白溶剂无干扰，三氟乙酸保留时间均在3min左右，不对称因子小于1.3，可准确定量。

TFA的各色谱柱分析谱图.png

图1 TFA的各色谱柱分析谱图

表1 各色谱柱的TFA峰拖尾因子

表1.png

【色谱条件】

色谱柱：CP ADME-HR S5; 4.6 × 250 mm

DP SP-ODS-P S5; 4.6 × 250 mm

S-II ODS S5; 4.6 × 250

流动相：A，量取7.0 mL磷酸、5.0 mL氢氧化铵，加入900 mL水中，混匀，用水稀释至1000 mL。【注】该溶液pH约为2.5。经0.45 μm孔径滤膜过滤、脱气，加入20 mL甲醇，混匀，继续脱气2分钟；B，乙腈/水 = 50/50，混匀并脱气

B% 0%(0 min) - 0%(5 min) - 100%(6 min) - 100%(14 min) - 0%(15 min) - 0%(25min)

流速：1.0 mL/min

柱温：25 ℃

检测：UV 210 nm

进样量：1 μL

浓度：三氟乙酸 1 μg/mL；胰岛素 50 μg/mL

CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱最佳分析结果如图2所示。

图2.png

图2 ADME-HR色谱柱最佳分析图

综上所述，参考USP标准：多肽中三氟乙酸的含量测定项下方法，采用CAPCELL PAK ADME-HR、DAISOPAK SP-120-5-ODS-P、SUPERIOREX II ODS色谱柱均可获得胰岛素及三氟乙酸混合溶液的良好分析结果。空白溶剂无干扰，三氟乙酸保留时间均在3 min左右，不对称因子小于1.3，可准确定量。

关键词：

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